人卵巢癌细胞A2780培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人卵巢癌细胞A2780
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640 + 10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
贴壁状态：少量漂浮
传代方法：建议以1:2比例进行传代
备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验；若对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理与运输

收到细胞后，将其培养至良好状态，并灌满完全培养液，封好瓶口，以保证运输质量。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台上进行无菌操作。之后，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。观察细胞生长情况，并拍照保存（40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片，将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打以使细胞完全脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变化，待细胞变圆后，加5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱保存；若后期需转入液氮罐中，则需在-80℃保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟；
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养；
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞特殊，在运输过程中可能会出现脱落的情况，属正常现象。请将所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟后，采用胰蛋白酶1-2ml处理。请确保遵循上述步骤进行细胞处理和培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况：- 运输途中的诸多问题，例如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，需重新发货；- 收到后48小时内需提供真实实验结果以验证污染问题；- 常温发货细胞在静置24小时及干冰发货细胞在复苏24小时后若绝大多数未存活，需提供照片。

2）不予重发的情况：- 客户造成的细胞污染；- 不当操作影响细胞状态；- 非推荐培养体系导致问题。

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