### SNU-1033细胞培养说明书

一、细胞培养条件

- 细胞名称：SNU-1033
- 生长特性：贴壁生长
- 冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
- 培养体系：1640 + 10% FBS + 1% 双抗
- 传代方法：首次建议1:2传代
- 备注：用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。用75%酒精喷洒整个细胞瓶消毒后，将细胞瓶放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行处理。观察细胞生长情况并拍照保存（建议在40x、100x、200x下各拍一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认为收到状态良好。传代后，建议将一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配制的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖稍微松动。

三、细胞培养步骤

a) 细胞传代：
若细胞未超过80%汇合度，则将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超80%，可进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙、无镁离子的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其撤回操作台，轻敲后加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打以使细胞完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b) 细胞冻存：
1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS洗涤细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞，使其脱落。将悬液转移至15ml离心管中，与上文相同条件离心。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后置入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中保存24小时以上后再转入液氮罐中。

c) 细胞复苏：
1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，细胞沉淀重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项：
一些细胞可能在运输过程中发生脱落，这是正常现象。若脱落情况较严重，可将培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清并进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶轻轻吹打，重悬消化1-2分钟后结束反应，再次离心并重悬。之后按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款：

1) 可重发情况：
1. 运输途中遭遇的问题，如细胞丢失、破损、严重漏液等可重发。
2. 收到后48小时内如发现细胞污染，并提供真实实验结果，经过核实后可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时大多数细胞未存活须提供真实清晰照片，重发。
4. 若收到了细胞在不打开包装的情况下静置4小时后出现污染，亦可重发。
5. 对细胞活性的质疑，请在收到产品7天内提出，并使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经过核实后重发。
6. 收到产品当天以及第二天、第三天请务必拍照，若超过3天未告知，则视为产品合格。若出现问题，需提供收到细胞前3天照片及详细操作步骤，经技术人员判断后可重发。

2) 不予重发的情况：
1. 客户造成细胞污染，不予重发。
2. 不当操作导致细胞状态不佳的情况，不予重发。
3. 使用与本库推荐的培养体系不符，导致细胞状态不佳的情况，不予重发。
4. 若未提供培养前3天的照片，即不予重发。
5. 细胞处理过程中，如有其它不当操作，即不予重发。
6. 若在收到2天内未告知也不予重发。
7. 具体情况另行处理。

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