在上期中，我们介绍了细胞转染的基础知识及其应用，本期将深入探讨细胞转染中常用的病毒转染相关内容。病毒转染是一种高效的细胞转染技术，利用病毒载体将外源基因包裹在病毒外壳中，利用其天然的感染性将外源基因导入宿主细胞，并在细胞内实现稳定表达。根据病毒载体的不同，病毒转染主要分为腺病毒、慢病毒、逆转录病毒和腺相关病毒等类型。其中，慢病毒因具有较高的转染效率和广泛的应用范围，尤其在实验室中被广泛使用。

一、慢病毒的结构

慢病毒是一种以HIV-1为基础的基因治疗载体，属于有包膜的RNA病毒，直径在80-120纳米之间，具有二十面体对称的球形结构。病毒颗粒的最外层为包膜，包膜蛋白决定了其感染细胞的类型，内部依次是基质蛋白和衣壳，在最里面则是两条相同的正股RNA链及多种酶，如逆转录酶、整合酶及蛋白酶。

慢病毒的基因组较为复杂，以HIV-1为例，其基因组含有9个基因，其中包括gag、pol、env这三个编码病毒结构的基因，tat和rev两个调节基因，以及vif、vpr、vpu和nef四个辅助基因。随着对慢病毒基因组理解的深入及转染技术的进步，慢病毒的基因组被逐步编辑并分布到不同的质粒中，从而形成了第一代、第二代及第三代慢病毒系统。目前，第二代三质粒系统和第三代四质粒系统是应用较为广泛的选择。

二、慢病毒的复制与包装

为了提高靶细胞的转染效率，需事先获取高滴度的慢病毒，这一过程被称为慢病毒的复制包装。通常，按照特定的比例将三种质粒共同转染到293T细胞中，并在48-72小时后收集含有病毒的上清液，随后可通过离心或浓缩处理获得病毒。

三、慢病毒感染细胞的过程

慢病毒感染细胞的第一步是通过其表面的包膜蛋白与宿主细胞吸附和结合，并与宿主表面的受体相结合。随后，与宿主细胞膜融合后，病毒内的结构蛋白、酶和核心被释放。在逆转录酶的作用下，慢病毒的RNA进行逆转录，形成整合前的复合物。此复合物进入细胞核后，整合酶催化其整合到宿主细胞的基因组中，最终通过外源基因的前启动子驱动在宿主细胞质中表达。

四、常见的慢病毒转染类型

1. **慢病毒荧光转染**：通过转染标记的荧光基团（如GFP、mCherry或RFP等），筛选出带有荧光蛋白的目标细胞。这些细胞可通过荧光显微镜或流式细胞仪来检测转染后的荧光强度，从而评估转染效率。

2. **慢病毒Luciferase化学发光转染**：转染带有荧光素酶编码基因的质粒，可以在细胞内或小鼠体内产生荧光素酶。加入荧光素后，在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素被氧化并发出光。这种技术能够高灵敏地检测活体动物体内肿瘤的生长和转移过程。

3. **慢病毒细胞永生化转染**：通过病毒感染、辐射或化学致癌等方法打破细胞的分裂次数限制，使其获得有限的分裂能力。使用慢病毒转染外源性的永生化基因，可以获得永生化细胞株，这些细胞具有无限增殖能力且细胞间差异性小。

尊龙凯时(中国区)人生就是搏致力于为科研人员提供稳定的转染细胞系，包括多种类型的慢病毒转染服务。我们的产品涵盖绿荧光蛋白（GFP）、红荧光蛋白（RFP）、化学发光（LUC）及SV40永生化转染等，确保客户能获得高效、可靠的实验结果。

我们的服务包括：SNTS-L001（获得GFP稳定表达的细胞，周期：3-4周）；SNTS-L002（获得RFP稳定表达的细胞，周期：3-4周）；SNTS-L003（获得mCherry稳定表达的细胞，周期：3-4周）；SNTS-L004（获得LUC稳定表达的细胞，周期：3-4周）；SNTS-L005（获得SV40永生化的细胞，周期：6-8周）。