尊龙凯时(中国区)人生就是搏提供大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的详细培养指南，以下内容包括细胞培养条件、操作步骤以及注意事项，旨在确保实验的顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁与悬浮混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代，2天后更换培养液。

备注：悬浮细胞需离心收集，贴壁细胞按正常贴壁操作处理，收集瓶内培养基以备后续培养使用。

二、细胞处理步骤

在收到细胞并确认状态良好后，应及时填满完全培养液并封口，防止细胞损伤。在解除包装后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后转移到超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以恢复稳定状态，接着进行下一步处理。

在显微镜下观察细胞生长情况，拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片可作为后期售后服务的依据，若未能提供照片，则默认为收到的细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%的汇合度，收集瓶中的完全培养液并保持5ml，放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；若细胞密度超过80%，需进行传代。对于贴壁细胞，可以按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁的PBS洗涤1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml进行消化，观察细胞状态，待细胞变圆并脱落后，加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，吸出悬液并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代并补充新的完全培养基至5-8ml，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。

对于悬浮细胞，可以采取以下两种方法进行传代：

1. 收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基后混匀，再按1:2比例分到新的8ml完全培养基瓶中。
2. 半数换液方式，弃去半数培养基，将剩余细胞悬起，分瓶传代。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至离心管中进行离心处理。
3. 弃去上清后，加入1ml无血清冻存液混匀并装入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，若需转移至液氮罐，需在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管并快速放入37℃水浴解冻，确保冻存管内无冰晶后，用75%酒精消毒外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，进行离心处理。
3. 弃去上清后，重悬细胞并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱内，隔天更换成新鲜完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能不牢固，导致脱落现象，这是正常的。如脱落较多，收集培养液并离心处理，确保后续实验的顺利进行。若细胞状态不佳，需提供相关照片及操作步骤以便进行售后服务。

五、售后条款

针对细胞出现问题时，尊龙凯时(中国区)人生就是搏承诺提供相应的售后服务，若遇到细胞运输损坏、污染等情况可进行重发。客户需在规定时间内提供实验结果及照片以便核实。具体售后政策详见公司规定。